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                                  D/RNA Circular Ligase
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                                  • 產品類別: 產品中心 D/RNA Circular Ligase
                                  • 產品描述:
                                  • 圖示為D/RNA Circular Ligase催化長度為89個堿基的單鏈DNA在分子內5'和3'端連接成環后產物的10% PAGE變性膠圖。


                                    貨號與規格:B4001-10ku



                                    D/RNA Circular Ligase是T4 RNA Ligase 1的改進版,具備很好的熱穩定性,可高效地催化單鏈的DNA或RNA分子內環化(intramolecular ligation)。


                                    具體特征:

                                    1)待環化的單鏈DNA/RNA模板的5'端需含有 -PO43-,3'端需為 -OH;

                                    2)反應緩沖液中需添加ATP和Mn2+;

                                    3)可環化長度超過30個堿基的單鏈DNA/RNA序列,對于較長(幾百堿基)的序列,可咨詢技術人員提升環化效率;

                                    4)******反應溫度在58-62攝氏度;

                                    5)D/RNA Circular Ligase中無可檢測到的kinase、DNase、RNase等酶活性;

                                    6)具有等同于CircLigase(EpiCentre)的活性。


                                    保存緩沖液:50% glycerol,50 mM Tris pH 7.5, 100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.1% Triton X-100。


                                    10X反應緩沖液:0.5 M MOPS pH 7.5,0.1 M KCl,50 mM MgCl2,10 mM DTT。在最終的1X反應體系中,需補充ATP至終濃度為0.05 mM,補充MnCl2至終濃度為2.5 mM。


                                    Unit定義:1個unit的D/RNA Circular Ligase可催化1 pmol的長度為89個堿基的DNA模板序列在60度下1小時內成環,產率為40-50%。


                                    產品規格:10000 units溶解在100 uL緩沖液中,濃度為100 units/uL。


                                    說明及注意事項:

                                    1)通常若反應體系過小,不建議使用大量的DNA或RNA模板。對于20 uL的反應體系,建議使用10 pmol以下的DNA/RNA;

                                    2)若反應模板量較大,可增大反應體積。原則上來講,反應體積越大,DNA/RNA濃度越低,越有利于intramolecular ligation;

                                    3)若某些特定序列成環效率較低,可適當增加D/RNA Circular Ligase的用量,并延長反應時間至3-4小時。不建議過夜反應,在MnCl2存在的情況下,長時間反應可能造成DNA/RNA損傷或降解。

                                  制作:尹思遙

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